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采血卡廠家詮釋從頭發(fā)樣本中提取DNA
采血卡廠家詮釋從頭發(fā)樣本中提取DNA是，使用微觀玻璃研磨和有機(jī)溶劑提取方案的改進(jìn)版本從毛干中分離DNA。由于這些方案使標(biāo)本暴露于污染風(fēng)險(xiǎn)增加，本研究使用二硫蘇糖醇（DTT）（Hi-media）以光滑的化學(xué)消化方法取代了繁瑣的物理消化方法，因?yàn)樗且环N相對(duì)較強(qiáng)的還原劑。高鹽含量和陰離子洗滌劑。將消化緩沖液（500μl; 10mM Tris-HCl，10mM EDTA，50mM NaCl，20％SDS，pH7.5）與40μl1MDTT一起加入1.5ml微量離心管中（至終濃度）~80mM，240mM乙酸鈉，pH5.2）和15μl10mg/ ml蛋白酶K（至終濃度~0.3mg / ml; Himedia）。在渦旋之前將頭發(fā)樣品加入到該溶液中并在56℃下孵育2小時(shí)。孵育2小時(shí)后，再次渦旋樣品管，再加入40μl1MDTT和15μl10mg/ ml蛋白酶K，然后溫和混合并在60℃下再孵育2小時(shí)或直到頭發(fā)完全溶解。
然后用等體積的苯酚：氯仿：異戊醇溶液（25：24：1）從每個(gè)樣品中提取DNA，并通過將管倒置幾分鐘輕輕混合。將樣品以10,000g （4℃）離心（Eppendorf 5415R）10分鐘，然后將上層水層轉(zhuǎn)移到新鮮的滅菌微量離心管中。加入RNaseA（10μl，10mg / ml; Fermentas，Thermo Scientific）并保持在37℃溫育30分鐘。加入等體積的氯仿：異戊醇，再次在10,000g （4℃）下離心（Eppendorf 5415R）10分鐘。將上層水層轉(zhuǎn)移到新鮮的滅菌微量離心管中，然后加入兩倍體積的冷凍異丙醇和十分之一體積的3M乙酸鈉。將樣品在-20℃下冷卻1小時(shí)以進(jìn)行DNA沉淀。將樣品在10,000g（4℃）下離心（Eppendorf 5415R）10分鐘。棄去上清液，加入250μl70％乙醇，輕輕敲打沉淀，然后以10,000rpm進(jìn)一步離心（Eppendorf 5415R）10分鐘。棄去上清液，將沉淀物在層流氣流中風(fēng)干，重懸于50μl無核酸酶水或1×TE緩沖液中，并在-20℃或-80℃冷凍保存。
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